解讀:嘔吐毒素
嘔吐毒素主體成分為DON(deoxynivalenol, 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇),屬于單端孢霉烯族化合物,主要由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌、擬枝孢鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等鐮刀菌產(chǎn)生。另外,頭孢菌屬、漆班菌屬、木霉屬等的菌株都可產(chǎn)生該毒素。單端孢霉烯族毒素共有150多種,是一類強(qiáng)有力免疫抑制劑,所引起典型癥狀是采食量降低,所以這類毒素又叫飼料拒食毒素。嘔吐毒素(DON)是其中最重要一種毒素,主要來(lái)自鐮刀菌屬(Fusarium),尤其是禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)和黃色鐮刀菌(Fusarium culmorum)。由于它可以引起豬的嘔吐,故又名嘔吐毒素(vomitoxin,VT)。由于它可以引起豬的嘔吐而得名,對(duì)人體有一定危害作用,歐盟分類標(biāo)準(zhǔn)為三級(jí)致癌物。
嘔吐毒素對(duì)人和動(dòng)物均有很強(qiáng)的毒性,能引起人和動(dòng)物嘔吐、腹瀉、皮膚刺激、拒食、神經(jīng)紊亂、流產(chǎn)、死胎等,豬是對(duì)嘔吐毒素最敏感的動(dòng)物,家禽次之,反芻動(dòng)物由于瘤胃微生物的作用,耐受力最強(qiáng)。對(duì)生長(zhǎng)肥育豬而言,含有12~14g/t嘔吐毒素的飼料飼喂后10~20min即會(huì)出現(xiàn)嘔吐、不正常的焦慮和磨牙現(xiàn)象,含毒量19g/t以上即完全拒食。研究表明,不同種類動(dòng)物的LD50(mg/kg)為:小鼠經(jīng)口46.8腹腔注射70.0;新生大鼠經(jīng)口7.3;大鼠徑口7.3;北京雛鴨皮下注射27.0;而致吐劑量為:北京雛鴨皮下注射10.0;狗皮下注射0.1經(jīng)口0.1;豬腹腔注射0.05;鴿子經(jīng)口10.0。
幾乎所有的單端孢霉烯族毒素都有可引起鴨雛、貓、狗、豬、鴿子等動(dòng)物的嘔吐。豬對(duì)DON的致吐作用最敏感,約為其他動(dòng)物的100-200倍。DON還可引起拒食反應(yīng)。致嘔吐作用的機(jī)理除了DON對(duì)粘膜的刺激作用外,同時(shí)也有對(duì)中樞神經(jīng)的作用。曾有人以含DON毒素18-20mg/kg的赤霉病小麥,按0.5-50﹪的不同比例混入飼料中,喂養(yǎng)大鼠18個(gè)月,發(fā)現(xiàn)高比例組動(dòng)物睪丸、子宮、肝、腎臟受到一定的損害。
DON化學(xué)性能非常穩(wěn)定,一般不會(huì)在加工、儲(chǔ)存以及烹調(diào)過(guò)程中破壞,在實(shí)驗(yàn)室條件下可長(zhǎng)期貯存保持毒力不變,有較強(qiáng)的熱抵抗力,121℃高壓加熱25min僅有少量破壞。酸性環(huán)境不影響其毒力,但是加堿或高壓處理可破壞部分毒素含有嘔吐毒素谷物類加工產(chǎn)品,在加工過(guò)程中,由于技術(shù)限制不可能完全去除,人類食用含有一定量嘔吐毒素糧油食品后,會(huì)出現(xiàn)胃部不適、眩暈、腹脹、頭痛、惡心、嘔吐,手足發(fā)麻、全身乏力、顏面潮紅、以及食物中毒性白細(xì)胞缺乏癥。癥狀嚴(yán)重者可見(jiàn)呼吸、脈搏、體溫及血壓的波動(dòng),四肢發(fā)軟、步態(tài)不穩(wěn)、形似醉酒,故有的地方稱其為“醉谷病”。
嘔吐毒素的產(chǎn)毒菌株適宜在陰涼、潮濕的條件下生長(zhǎng)。廣泛存在于大麥、小麥、玉米和燕麥中。不同動(dòng)物對(duì)嘔吐毒素的敏感程度不同,豬是對(duì)嘔吐毒素最敏感的動(dòng)物,斷奶仔豬尤其敏感。飼料中0.3~0.5mg/kg的微量毒素就會(huì)引起豬拒食、生長(zhǎng)下降以及對(duì)傳染病的抵抗力下降,飼料中含1mg/kg以上的嘔吐毒素時(shí)可引起豬拒食、嗜睡、生長(zhǎng)嚴(yán)重受阻、體增重減慢、免疫機(jī)能減退、肌肉協(xié)調(diào)性喪失以及嘔吐等癥狀。此外,嘔吐毒素可在人和動(dòng)物體內(nèi)蓄積,具有致畸性、神經(jīng)毒性、胚胎毒性和免疫抑制作用。
嘔吐毒素主要在胃腸道吸收,經(jīng)血液循環(huán)進(jìn)入肝臟代謝后經(jīng)腎臟隨尿液排出,造成各器官的廣泛損傷。嘔吐毒素在人體中的半衰期為2~4h,代謝迅速,8h后就檢測(cè)不到嘔吐毒素和它的代謝物。
嘔吐毒素對(duì)微血管影響
嘔吐毒素可引起雛鴨、豬、貓、狗、鴿子等動(dòng)物的嘔吐反應(yīng),嚴(yán)重者可造成死亡。嘔吐毒素的急性毒性與動(dòng)物的種屬、年齡、性別、染毒途徑有關(guān),雄性動(dòng)物對(duì)毒素比較敏感。急性中毒的動(dòng)物主要表現(xiàn)為站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍、豎毛、食欲下降、嘔吐等,還可引起動(dòng)物的拒食反應(yīng),其中豬對(duì)嘔吐毒素最為敏感。嘔吐毒素能引起豬食欲減退或廢絕,嘔吐,體重下降,流產(chǎn),死胎和弱仔,抑制免疫機(jī)能和降低機(jī)體抵抗力。對(duì)生長(zhǎng)肥育豬而言,含有14mg/kg嘔吐毒素的飼料飼喂后10~20min即會(huì)出現(xiàn)嘔吐、不正常的焦慮和磨牙現(xiàn)象,嘔吐現(xiàn)象僅發(fā)生在第1天。而且嘔吐毒素含量在0~14mg/kg的試驗(yàn)中,飼糧中每增加1mg/kg嘔吐毒素,生長(zhǎng)肥育豬的采食量減少6%,在含毒量10mg/kg以上即完全拒食。對(duì)于嘔吐毒素的慢性毒性世界研究都比較少。有人用大鼠進(jìn)行了為期2年的染毒試驗(yàn),嘔吐毒素的濃度為0、1、5、10mg/kg,雄性、雌性大鼠各分為4組,試驗(yàn)結(jié)束后發(fā)現(xiàn),各組動(dòng)物均未見(jiàn)死亡,動(dòng)物體重增加與染毒劑量呈負(fù)相關(guān)。雌性大鼠的血漿中IgA、IgG濃度較對(duì)照組飼料中嘔吐毒素的危害與防治增高,生化指標(biāo)、血液學(xué)指標(biāo)也可見(jiàn)明顯異常。病理學(xué)檢查還發(fā)現(xiàn)有肝臟腫瘤、肝臟損害。
長(zhǎng)期攝入被DON污染的病麥或粗毒素對(duì)動(dòng)物有一定的毒性,可影響動(dòng)物的生長(zhǎng)、繁殖率和子代的存活率,甚至可使生長(zhǎng)停滯,形成“僵鼠”,并產(chǎn)生對(duì)心、肝、腎的傷害,嚴(yán)重時(shí)損害造血系統(tǒng)造成死亡。但不同種屬、性別的動(dòng)物對(duì)DON的敏感程度不一,豬是最敏感的動(dòng)物,反芻動(dòng)物比其它動(dòng)物受的影響小,奶牛的健康狀況、產(chǎn)奶量、攝食量幾乎不受影響,牛奶中也檢測(cè)不到DON及其脫氧產(chǎn)物。
在很多物種上已經(jīng)得到證實(shí),DON可以通過(guò)胎盤轉(zhuǎn)移到胎兒。懷孕母豬感染DON后在胎兒的血漿、肝和腎中均檢測(cè)到DON。用DON純品灌喂Swis小鼠,引起明顯的胚胎毒作用和骨骼畸形:DON在10~15mg/kg劑量時(shí)胎兒100%吸收,在5mg/kg的劑量時(shí)胎兒吸收率為80%。在大鼠妊娠期5~19d中飼喂5mg/kg的DON會(huì)降低胎兒的發(fā)育,母鼠采食量和平均日增質(zhì)量都顯著降低,胎兒質(zhì)量、母體子宮質(zhì)量和頭臀長(zhǎng)降低,胸骨、趾骨、背骨和椎骨等骨化能力下降,這些可能是由于母體毒性和胎兒大小減小造成的。在嚙齒動(dòng)物上的致畸和繁殖試驗(yàn)證實(shí)DON影響大鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng),導(dǎo)致吸收胎增多、骨骼形成不良及仔鼠出生后存活率的降低。剛斷奶的幼鼠除了在血漿和體組織中檢測(cè)到DON質(zhì)量濃度明顯高于成年鼠以外,DON誘導(dǎo)幼鼠脾和肺中產(chǎn)生的IL-6和TNF-α質(zhì)量濃度也比成年鼠的高,持續(xù)的時(shí)間更長(zhǎng),且脾中IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表達(dá)量比成年鼠高出2~3倍,這些均表明幼鼠對(duì)DON引起的多種影響的反應(yīng)比成年鼠敏感,所以DON對(duì)幼鼠機(jī)體組織造成的負(fù)荷更大。Vesely等研究了DON對(duì)于3日齡雞胚的毒性作用,發(fā)現(xiàn)其胚胎毒性劑量范圍很窄(1~3mg/kg),DON致使試驗(yàn)組雞胚頭部畸形,身體發(fā)育畸形,畸形率明顯高于對(duì)照組。
分布
有調(diào)查顯示,中國(guó)飼料和原料霉菌毒素污染超標(biāo)的比例為60%~70%,其中嘔吐毒素的超標(biāo)比例接近70%,在被檢的玉米、麩皮和DDGS樣品中嘔吐毒素的檢出率均高達(dá)90%以上,分別為92.9%、92.3%和100%。豆粕的檢出率較低為54.5%。麩皮和豆粕中嘔吐毒素未見(jiàn)超標(biāo),其平均含量分別為0.44mg/kg和0.05mg/kg,屬于輕度污染。玉米中嘔吐毒素的超標(biāo)率為57.1%,毒素平均含量為1.01mg/kg,其最高含量為2.13mg/kg,屬于中度污染。DDGS中嘔吐毒素的超標(biāo)率為88.2%,毒素平均含量為1.36mg/kg,最低含量為0.85mg/kg,最高含量為1.72mg/kg,屬于中度污染。玉米和DDGS中嘔吐毒素的平均含量極顯著高于麩皮和豆粕(P<0.01),DDGS中嘔吐毒素的平均含量顯著高于玉米(P<0.05),麩皮中嘔吐毒素的平均含量極顯著高于豆粕(P<0.01)。被檢配合飼料中嘔吐毒素的檢出率為97.4%,仔豬料、中豬料、妊娠母豬料和哺乳母豬料的檢出率高達(dá)100%。其中,乳豬料嘔吐毒素未見(jiàn)超標(biāo),其平均含量為0.28mg/kg,顯著低于其他種類全價(jià)料(P<0.05),屬于輕度污染。仔豬料、中豬料、大豬料、妊娠母豬料和哺乳母豬料均有不同程度的超標(biāo),超標(biāo)率分別為14.3%、14.3%、22.2%、10.0%和23.1%,其最高含量分別為2.31、1.14、1.44、1.45mg/kg和1.52mg/kg,屬于中度污染。
脫毒方法
嘔吐毒素的污染已引起人們的高度重視,但許多國(guó)家的飼料及飼料原料嘔吐毒素限量標(biāo)準(zhǔn)和污染程度判定標(biāo)準(zhǔn)尚不完整,也不統(tǒng)一。如美國(guó)制定了飼料用谷物及其副產(chǎn)品(除玉米外)嘔吐毒素允許限量≤5mg/kg,歐盟制定玉米及其副產(chǎn)品允許限量≤1.75mg/kg。中國(guó)制定了部分配合飼料(如,豬、禽及犢牛)中嘔吐毒素的限量標(biāo)準(zhǔn),但未制定飼料原料(除DDGS外)中嘔吐毒素限量標(biāo)準(zhǔn)。
1993年,DON被世界衛(wèi)生組織(WTO)的癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)劃定為第3類,即“無(wú)法分類為對(duì)人類有致癌效應(yīng)”的物質(zhì)。基于長(zhǎng)達(dá)2年的低劑量DON小鼠喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明DON不具有致癌的危害,得出NOEL(每日100μg/kg)及100倍的安全因子,食品添加劑國(guó)際法典委員會(huì)JECFA提出了一個(gè)不會(huì)對(duì)人類免疫系統(tǒng)、生長(zhǎng)和生殖產(chǎn)生負(fù)面影響的DON的PMTDI為1μg/kgb.w.,并認(rèn)為DON的現(xiàn)有數(shù)據(jù)不足以建立一個(gè)不會(huì)導(dǎo)致人類急性疾病暴發(fā)的DON水平。委員會(huì)還就膳食中DON的攝入量進(jìn)行了初步評(píng)估,結(jié)果發(fā)現(xiàn)世界上許多地區(qū)膳食中DON的攝入量可能會(huì)超過(guò)此值,但是考慮到在攝入量估計(jì)過(guò)程中由于DON的含量水平和消費(fèi)量的不確定性,以及食品加工過(guò)程中對(duì)DON濃度的不同程度的降低,會(huì)使DON攝入量的估計(jì)產(chǎn)生極大的不確定性。因此,委員會(huì)維持了DON的PMTDI為1μg/kg。
嘔吐毒素的防治首先是防止霉菌的產(chǎn)生,而防霉關(guān)鍵在于要嚴(yán)格控制飼料和原料的水分含量、控制飼料加工過(guò)程中的水分和溫度、選育和培養(yǎng)抗霉菌的飼料作物品種、選擇適當(dāng)?shù)姆N植或收獲技術(shù)、注意飼料產(chǎn)品的包裝、貯存與運(yùn)輸、添加防霉劑等。但需注意的是使用防霉劑無(wú)法去除飼料原料中已存在的霉菌毒素,添加防霉劑只是預(yù)防作用,所以飼料的脫毒也是必要的一項(xiàng)措施。飼料及飼料原料發(fā)生霉變后,產(chǎn)生的嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)是一種無(wú)色針狀結(jié)晶具有較強(qiáng)的熱抵抗力。因此,可以根據(jù)飼料霉變的程度采取不同的方法進(jìn)行脫毒處理。一般有物理脫毒法、化學(xué)脫毒法、酶解法。
物理脫毒法主要是水洗法、剔除法、脫胚去毒法、溶劑提取法、加熱去毒法、輻射法等; 化學(xué)脫毒法主要是采用堿或氧化劑進(jìn)行處理脫毒。上述的諸多脫毒方法,在實(shí)際應(yīng)用中對(duì)于飼料業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)來(lái)說(shuō)均不適用。因其操作不但困難,且大批量的飼料及原料用此類方法是無(wú)法進(jìn)行, 而且經(jīng)化學(xué)脫毒處理后往往會(huì)降低飼料的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和適口性。
酶解法主要是選用某些酶,利用其降解作用,使霉菌毒素破壞或降低其毒性。與物理學(xué)和化學(xué)方法相比,酶的降解處理法對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)成分的損失和影響較少,但因其費(fèi)用高,效果不穩(wěn)定制約著該方法的廣泛應(yīng)用。
吸附法即在飼料里添加霉菌毒素吸附劑進(jìn)行脫毒的一種方法,這種方法仍是一個(gè)比較可行的方法。但在霉菌毒素吸附劑的選用上,應(yīng)認(rèn)真考慮。因?yàn)槲絼┻x用不當(dāng),不但起不到吸附霉菌毒素的作用,還會(huì)產(chǎn)生副作用。霉菌毒素吸附劑的選用,一般應(yīng)考慮以下幾方面因素:1)必須具備高吸附能力。原則上選擇產(chǎn)品比表面積在600以上的吸附劑。2)選擇性吸附。理想的霉菌毒素吸附劑應(yīng)具備只吸附毒素,不吸附營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的特點(diǎn)。3)廣譜吸附。因?yàn)橥ǔN廴驹系拿咕舅夭恢灰环N,所以選擇的霉菌毒素吸附劑一般應(yīng)對(duì)多數(shù)霉菌毒素都有效。4)無(wú)副作用。
檢測(cè)方法
真菌毒素檢測(cè)儀,真菌毒素快速檢測(cè)儀,真菌毒素殘留定量分析儀GY-710真菌毒素殘留定量分析儀應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析的原理,通過(guò)檢測(cè)線熒光定量卡中的熒光強(qiáng)弱程度,定量分析待檢樣品中真菌毒素殘留含量,真菌毒素快速檢測(cè)儀能夠快速定量檢測(cè)糧食、飼料、谷物、食用油、調(diào)味品等食品中黃曲霉毒素、T2毒素、嘔吐毒素、赭曲霉毒素、伏馬毒素、玉米赤霉烯酮,真菌毒素殘留定量分析儀適用于糧油監(jiān)測(cè)中心、糧油飼料生產(chǎn)加工、食品加工貿(mào)易、畜禽養(yǎng)殖戶自查、工商質(zhì)監(jiān)部門用于市場(chǎng)快速篩查等。